當(dāng)色譜柱壓力升高，色譜柱峰形發(fā)生變化如出現(xiàn)嚴(yán)重拖尾、肩峰甚至峰分岔，分離度降低，這些都強(qiáng)烈提示色譜柱受到污染。

可采用以下步驟處理：

• 如系統(tǒng)接有在線過(guò)濾器和保護(hù)柱，首先排查在線過(guò)濾器與保護(hù)柱，進(jìn)行更新替換。日常操作中，當(dāng)壓力升高10%或柱效降低10%時(shí)，就應(yīng)考慮更換在線過(guò)濾器和/或保護(hù)柱。
• 使用高比例的有機(jī)溶劑進(jìn)行沖洗(請(qǐng)注意避免鹽析出，通常可使用梯度升高法，然后維持在高比例甚至100%有機(jī)溶劑條件下)。此操作通常可洗去大部分污染物。
• 如有機(jī)溶劑清洗不能解決問(wèn)題，可采用如下方法進(jìn)行色譜柱的清洗和再生。根據(jù)樣品性質(zhì)以及你所了解的污染物性質(zhì)選擇清洗方法，用20倍柱體積(即，對(duì)于4.6x250mm柱，相當(dāng)于80mL)的HPLC級(jí)溶劑清洗色譜柱，將流動(dòng)相溫度升至35-55?C可提高清洗效率。
• 可以考慮對(duì)色譜柱進(jìn)行倒沖，特別是當(dāng)問(wèn)題表現(xiàn)為壓力急劇升高，提示有顆粒型物質(zhì)直接堵塞于色譜柱入口端篩板處時(shí)。操作時(shí)，將色譜柱倒接，并與檢測(cè)器斷開(kāi)。使用低流速0.2ml/min，進(jìn)行過(guò)夜沖洗，并封堵檢測(cè)器入口及出口端以免溶劑揮干產(chǎn)生氣泡。甚或，將色譜柱小心的打開(kāi)，直接更換柱入口端篩板。
• 備注：以上沖洗和再生程序?yàn)榉礇_！